**Composition :** Les milieux à base de lait existant sur le marché contiennent la totalité des protéines solubles et micellaires. L’originalité du milieu INRA 96 est de ne contenir que la fraction pure des protéines micellaires du lait, hautement protectrices des spermatozoïdes.

Le milieu INRA 96 contient des antibiotiques (Pénicilline et Gentamicine) et un fongicide (Amphotéricine B).

**Préparation de la dose d’insémination :**

- Déterminer le nombre de doses, préparer le volume de diluant nécessaire et le placer au bain-marie à +37ºC en attendant la collecte de la semence. Si n doses d’insémination sont nécessaires, préparer nx10ml de diluant INRA 96.

Note : Si la totalité du diluant n’est pas utilisée, il est possible de le fractionner dans des tubes stériles et de le congeler. Cependant, un seul cycle de congélation est accepté. Lorsque le diluant est congelé, il est recommandé de le décongeler dans de l’eau chaude à +37ºC.

- Recueillir la semence, la filtrer puis évaluer la concentration de spermatozoïdes.

- Déluer la semence à une concentration finale de 20x10^6 spermatozoïdes par ml.

- Conditionner la semence diluée en doses de 10 ml pour inséminer immédiatement ou pour la conserver en vue d’inséminations différées.

Note : Le milieu INRA 96 a démontré son efficacité après 24 heures de conservation aussi bien à +15ºC qu’à +4ºC. Cependant, les résultats obtenus après 24 h de conservation (résultats de 1994 à 1996) montrent que la fertilité de certains étalons est améliorée avec une conservation de la semence à +15ºC. Cela ouvre une alternative pour les étalons dont la semence ne supporte pas les effets néfastes du « cold shock » lors de la baisse de température à +4ºC.

Ces résultats permettent, en fonction des besoins et de la qualité de la semence de l’étalon, la possibilité d’utiliser le diluant INRA 96 à la fois à des températures de +15ºC et de +4ºC.

D’autre part, les résultats obtenus après 72 h de conservation laissent envisager la possibilité de conserver la semence dans le milieu INRA 96 pendant plus de 24 h avant l’insémination.

**Autres précautions :**

Avertissement : ne pas utiliser de seringues avec piston en caoutchouc butyle noir en raison de problèmes de cytotoxicité vis-à-vis des spermatozoïdes.

**Le milieu INRA 96 permet la conservation et donc le transport de la semence équine**, soit à +4ºC (conditions anaérobies), soit à +15ºC (conditions aérobies).

**Suspension d’aspect blanc laiteux, stérile.** pH : 7,10±0,10. OSM : 330 à 360 mOSM/kg.